Azione della soluzione diluita di tossina dello Scorpione Rhopalurus Junceus su neoplasie maligne

AUTOR:

Lic. Biología: Misael Bordier Chibás

COLABORADORES:

Bióloga: Milagros María Martínez FernándezMéd. Veterinario esp. en Virulogía: Hector Luis Salgado SuarezIng. Pecuario: Guillermo Ubaldo Bory PérezDr. Médico Patólogo: Franklin Perry BerwickMéd. Veterinario: Rafaél Granado MartínezTéc. Higiene: Ramona Capó FrómetaEsp. en Citopatología: Roberto Alcides Aguirre CrespoTéc. en Diagnóstico Veterinario: Joaquín Quitian GranadoTéc. Veterin. y en Cría de Ani. de Lab: Vivian Silveira VillaDr. Prof. En Bioquímica: Armando Barthelemy Vidaillet; Lic.Mate, esp. en Comp. Elect.: Alberto A. Frómeta GómezIng. en Electrónica: Alexis Quito Pérez LorenzoDra. Esp. en Coloproctología: Elvira Poch MulgadoDra. esp. en Higiene: Ligia Bridón Romero

 

Dr. Misael Bordier

 

RIASSUNTO

Questo lavoro è iniziato ufficialmente nel 1985 nella provincia di Guantánamo, a Cuba, con l’obiettivo di utilizzare la tossina dello scorpione Rhopalurus junceus per ottenere una preparazione farmaceutica contro neoplasie maligne. Ha tra i suoi componenti: a) concentrazione di proteine; b) attività proteolitica: acida, neutra e alcalina (negativa); c) attività inibitoria della proteasi; d) attività fosfolifasica di tipo A2: 1.015 * 10-3; e) attività emolitica negativa. Di conseguenza, l’applicazione del preparato farmaceutico ha causato

 

RISULTATI

Gli animali che hanno ricevuto il prodotto per via orale, non hanno presentato evidenze clinico-morfologiche di tossicità, né modificazioni del loro comportamento abituale, nei diversi livelli di dose testati. Sono stati osservati risultati molto soddisfacenti consistenti in riduzione e completa obliterazione della massa tumorale in neoplasie maligne, naturali e inoculate, evidente miglioramento dei sintomi clinici e umorali. Nei test ematologici e biochimici è stata verificata la stabilizzazione dei parametri normali. Nella gastroscopia è stato possibile verificare che non vi fosse alterazione del succo gastrico. Non sono state inoltre apportate modifiche ai sistemi respiratorio e cardiovascolare. Si è ottenuta la negativizzazione dei test citologici eseguiti nell’area genitale e sulla parete addominale, con un’elevata sopravvivenza degli stessi; essere nei topi con il tumore ascitico di Erlich dell’85%; nei linfomi e negli adenocarcinomi del 97% e nei cani del 100%. Nei topi trattati per via intraperitoneale, sono stati osservati segni di eccitazione, lacrimazione, salivazione, setole dei capelli e tentata fuga per un periodo da 1 a 3 minuti. Gli animali che hanno ricevuto dosi più basse hanno evidenziato il quadro clinico discreto, in un modo più mite fino a 2 minuti. È stato osservato un guadagno significativo nel peso corporeo sia con i trattamenti intraperitoneale che orale. Nell’esame anatomopatologico, nessun danno cellulare irreversibile è stato osservato nelle cellule sane. Nei cani che portano tumori naturali che sono stati somministrati la dose di tossina diluita di 0,2 ml per kg al giorno sono stati utilizzati, con conseguente: riduzione e cancellazione di massa tumorale, esami citologici e biopsie negativizzazione, e migliora clinica e morfologica evidente, che è soddisfacente progressi compiuti negli animali è di beneficio incalcolabile, essendo possibile utilizzare la tossina per ridurre la morbilità e la mortalità prodotta negli esseri viventi, in quanto gli effetti della tossina diluita non produce alterazioni volta somministrate per via orale, come evidenziato dai test di controllo tossicologico acuto effettuati secondo gli standard internazionali per la procedura successiva e la preparazione dei farmaci.

CONCLUSIONI

1. L’azione antitumorale della soluzione acquosa dalla tossina dello scorpione Rhopalurus junceus è oggettiva e reale in questi animali oggetto di questa indagine.

2. Nei cani con tumori maligni naturali, la sopravvivenza era del 100% con completa obliterazione della massa tumorale e apparente miglioramento clinico e morfologico.

3. Con il tumore ascitico di Erlich nei topi, la sopravvivenza era superiore all’85% con obliterazione e riduzione delle cellule tumorali.

4. Nei topi con adenocarcinomi e linfomi, il risultato era una cura del 97%.

5. È più sicuro somministrare per via intraperitoneale nei topi albini omozigoti, tuttavia è meno sicuro nei topi albini maschi e femmine eterozigoti con un LD50 di 4,07 mg per kg di peso corporeo.

6. La somministrazione orale della tossina diluita in topi albini, maschi eterozigoti e femmine è innocua, non ha effetti tossici e manca un LD 50.

7. Nei montoni le manifestazioni digestive mediante somministrazione orale erano totalmente negative, questo dimostra ulteriormente la loro innocuità.

 

Di seguito lo studio completo in lingua originale

 

AUTOR

Lic. Biología: Misael Bordier Chibás

COLABORADORES

Bióloga: Milagros María Martínez Fernández

Méd. Vet., Esp. en Virulogía: Hector Luis Salgado Suarez.

Ing. Pecuario: Guillermo Ubaldo Bory Pérez

Dr. Médico Patólogo: Franklin Perry Berwick

Méd. Veterinario: Rafaél Granado Martínez

Téc. Higiene: Ramona Capó Frómeta

Esp. en Citopatología: Roberto Alcides Aguirre Crespo

Téc. en Diagnóstico Veterinario: Joaquín Quitian Granado

Téc. Veterin. y en Cría de Ani. de Lab: Vivian SilveiraVilla

Dr. Prof. En Bioquímica: Armando Barthelemy Vidaillet

Lic.Mate, Esp. en Comp. Elect. Alberto A. Frómeta Gómez

Ing. en Electrónica: Alexis Quito Pérez Lorenzo

Dra. Esp. en Coloproctología: Elvira Poch Mulgado

Dra. Esp. en Higiene: Ligia Bridón Romero

RESUMEN

Este trabajo comenzado oficialmente en 1985 en la provincia de Guantánamo, Cuba, tuvo como objetivo el empleo de la toxina del alacrán Rhopalurus junceus para obtener un preparado farmaceútico contra las neoplasias malignas. Este tiene entre sus componentes: a)concentración de proteinas; b) actividad proteolítica: ácida, neutral, y alcalina (negativa); c) actividad inhibidora de proteasas; d) actividad fosfolipásica tipo A2:1,015*10-3; e) actividad hemolítica negativa. Como resultado, la aplicación del preparado farmaceútico provocó:

-la lisis de los tumores inoculados y naturales en ratones y

perros

-fue comprobada la no toxicidad de dicha solución

-no tiene reacciones colaterales

-la evaluación farmacológica de esta mezcla confirma su efecto

cancerígeno

-estabilizador del sistema inmunológico

INTRODUCCION

El cáncer constituye una de las principales causas de muerte a nivel mundial. Altas son las cifras de morbimortalidad, tanto en el hombre como en los animales. En la actualidad se ha logrado detectar y curar el cáncer en un número superior al de cualquier época anterior, no obstante sigue siendo un gran problema de salud para la humanidad.

La naturaleza cubana tiene en sus entrañas preciadísimos tesoros, entre éstos se encuentran los escorpiones, una de las expresiones de vida terrestres más antigua, por cuya carga potencial de dolor y muerte han sido objeto de las más interesantes leyendas y mitos.

Los efectos de las picaduras de estos animales son conocidos desde épocas remotas entre éstos se pueden mencionar: hiperexitación, contracción muscular, fiebre, trastornos respiratorios y cardiovasculares, etc. Sin embargo, las aplicaciones médico-terapéuticas de la toxina que ellos segregan puede tener efectos beneficiosos insospechados.

La provincia de Guantánamo cuenta con buena representación de la escorpiofauna cubana, aquí se conocen por lo menos 8 especies de las 25 formas presentes en el país, con 5 formas endémicas para un 20% de endemismo. Las poblaciones del escorpión azul son abundantes y constituyen un recurso natural utilizable y sumamente apreciable.

Para resolver en animales y humanos los problemas de cancer se procede a la aplicación de varias sustancias con acción antitumoral, los conocidos citostáticos, los cuales producen reacciones secundarias muy indeseables, logrando una sobrevida determinada y no la curación total. Los citostáticos, como la etimología de la palabra lo expresa, solo detienen la multiplicación de las células tumorales y no su lisis, otra desventaja conocida es su efectividad limitada, pues segun el tipo y localización del tumor así será el antitumoral que se aplique. Ejemplo:

– La ciclofosfamida: se utiliza para linfomas, partes y órganos blandos produciendo trastornos hematológicos, hepáticos, digestivos y en la piel.

– El 5-fluouracilo: se utiliza en cancer de las vías digestivas y produce trastornos digestivos muy severos.

– La epirrubicina: es utilizada en mama, partes blandas y varios tipos de linfomas pero produce trastornos hematológicos, hepáticos y cardíacos.

– La vincristina: es de mucha utilización en neoplasias de la infancia y en linfomas, produciendo trastornos neurológicos.

– El bleomycín: para tumores de laringe, faringe y cuello del útero, pero puede producir fibrosis pulmonar e hiperpigmentación de la piel.

Tomando como base todo lo anterior expuesto y que la causa de las neoplasias es multifactorial nos motivó a utilizar a finales del año 1980 la toxina del alacrán Rhopalurus junceus como antitumoral.

ANTECEDENTES

La utilización de la toxina de alacrán o de escorpiones como anticancerígeno no tiene antecedentes en ningún país, ni investigador alguno, tanto en el ámbito de nuestro país como a nivel internacional.

A finales de la década de los años ochenta, una vez obtenido resultados alentadores, al lograr sobrevida indefinida en 85% de ratones blancos inoculados con el tumor ascítico de Erlich y en perros afectados por tumores venéreos espontáneos utilizando dosis de la toxina del alacrán Rhopalurus junceus por vía parenteral y oral respectivamente, se procedió el 31 de julio de 1989 a realizar una solicitud de búsqueda bibliográfica a la Biblioteca Nacional de Ciencia y Técnica de Cuba de la entonces Academia de Ciencias de Cuba respecto a las actividades:

-antibacteriana

-antiviral

-anticancerígena

de dicha toxina con la respuesta contenida en el código B-278, donde se envian 14 referencias bibliográficas como respuesta a la solicitud, en la cual se plantea no haberse encontrado información alguna respecto a los temas solicitados.

En 1991 se procedió a realizar otra solicitud de búsqueda a la ONITM (solicitud 300/91) con el título de “Aplicación de la toxina del alacrán contra neoplasias malignas, virus y bacterias” con campo de búsqueda AGIK 35/00, investigando todos los países y cubriendo todos los años, no encontrándose nada referente al tema, sólo se halló patentes sobre vacunas y sueros que contrarrestan el efecto tóxico de la picada del alacrán.

Más tarde, con fecha 14 de enero de 1994 y con la finalidad de lograr un certificado de autor bajo el título de “Composición Antitumoral” se solicitó el mismo a la ONIITM, obteniéndose el número de solicitud 4/94. Este certificado de autor se hizo efectivo a partir del 15 de enero de 1995 y su otorgamiento impuso una extensa y actualizada revisión bibliográfica correspondiente a la clasificación de patentes de la quinta edición AGIK-35/561 en la confirma que es novedosa y única en el mundo la utilización de la toxina de alacrán y escorpiones como sustancia de acción antitumoral.

DESARROLLO

Para la realización de los experimentos en animales se utilizaron:

a) Ratones

b) Perros

c) Carneros

y la solución acuosa del veneno del alacrán Rhopalurus junceus.

CARACTERISTICAS DEL PRODUCTO:

El producto puro o crudo es de color blanco azul, de aspecto lechoso, espeso, con olor similar a las algas marinas o mariscos, es insípido. Cuando se diluye en agua de inyección y se filtra se torna de color transparente e inodoro y después de procesarse es similar al agua.

Desde el punto de vista químico se le adjudican las siguientes propiedades:

– Fuerte inhibidor de las proteasas

– No proteolítico

– Proteínas de alto peso molecular capaz de atravesar la barrera encefálica

– Grado de pureza de un 98-99%

– Presencia de proteínas, carbohidratos, ácidos y bases, así como fermentos

– Inmuno-modulador

De los ratones:

Se les aplicó el tratamiento a un número de 300 ratones procedentes del Instituto Nacional de Oncología y Radiobiología de La Habana, el cual estaba en relación de ayuda a esta investigación, utilizándose la técnica de inoculación con tumor de Erlich y con adenocarcinomas y linfomas.

Incluimos las siguientes variables:

Sexo

Clase

Edad

Peso

Trabajamos con ratones de ambos sexos, de clase albina homocigóticos y heterocigóticos, en edades comprendidas de 6 meses a un año y de un peso de 15-20 gramos.

Se les inoculó por vía intraperitoneal la toxina diluida en agua para inyección. La dosis fue de 0,2 mg por kg de peso administradas en horas de la mañana, inyectables en días alternos durante un mes.

A los mismos se les realizó la anatomía patológica macroscópica y microscópica con la descripción histopatológica de disminución y atrofia de las células cancerígenas.

Los ratones utilizados se mantuvieron en locales con temperatura entre 26º C y 28º C y humedad relativa ambiente.

En los ratones tratados por vía intraperitoneal se observaron durante un período de 1 a 3 minutos:

-signos de excitación

-lagrimeo

-erizamiento de los pelos

-intento de fuga

Los animales que recibieron dosis inferiores evidenciaron el mismo cuadro clínico pero discreto, en forma más leve hasta 2 minutos.

Apreciándose ganancia del peso corporal en los tratamientos por vía intraperitoneal.

En el exámen anatomopatológico no se observó daño celular irreversible en las células sanas.

Se observó en ellos reducción, lisis y obliteración de estos procesos tumorales.

La supervivencia fue de un 85% para el tumor de Erlich y un 97% para linfomas y adenocarcinomas.

De los perros:

En número de 20 machos y hembras, de 1 a 12 años y un peso entre 8 y 28 kg y de diferentes razas.

Los 20 caninos eran portadores de patologías tumorales naturales de diferentes especies entre ellos adenocarcinomas y linfomas.

Estos fueron ingresados, tratados y controlados en la clínica veterinaria de Guantánamo.

La administración de la toxina del alacrán Rhopalurus junceus se administró por vía intraperitoneal, endovenosa y oral.

Los esquemas utilizados fueron los siguientes:

-5 perros de control

-5 tratados por vía intraperitoneal

-5 por vía endovenosa

-5 por vía oral

La dosis fue de 0,2 mg por kg de peso, administrados en horas de la mañana inyectables en días alternos y por vía oral diara durante 3 meses. A estos animales se les realizaron mediciones de los volúmenes tumorales y citológicos con biopsias evolutivas, manteniéndose los mismos en temperatura de 26ºC a 28ºC y humedad relativa ambiente.

Los que recibieron la solución medicamentosa por vía oral no presentaron evidencias clínico morfológicas de toxicidad, ni modificaciones de su conducta habitual dentro de los diferentes niveles de dosis ensayadas. De esta manera se observaron resultados altamente satisfactorios consistentes en:

– Reducción y obliteración completa de la masa tumoral en neoplasias malignas naturales, mejorando evidentemente la sintomatología clínica y humoral, comprobado por las pruebas hematológicas y bioquímicas donde no existió alteración de los parámetros establecidos.

– No existieron alteraciones de los aparatos respiratorios y cardiovascular, obteniéndose negativizacion de las pruebas citologicas realizadas en la esfera genital y pared abdominal.

Se obtuvo una alta supervivencia (100%) en los animales tratados portadores de linfomas y adenocarcinomas.

De los carneros:

Esta especie animal la utilizamos para comprobar las reacciones colaterales del producto donde incluimos un número de 20 carneros de sexo machos y hembras, jóvenes de un peso entre 28 y 51,5 kg.

El esquema fue el siguiente:

-10 carneros como control

-10 fueron tratados con toxina por via oral.

Para valorar si existia daño a nivel de sistema digestivo.

A ellos se les realizó análisis de hemograma, bioquímica sanguínea y gastroscopia.

La dosis en carneros fue de 0,2 mg por kg de peso administrados en horas de la mañana por via oral diaria durante 3 meses.

Esto se realizó en la clinica veterinaria en condiciones de medio ambiente natural.

En la prueba hematológica y bioquímica se comprobó que no hubo alteración ninguna en estos cuadrúpedos y en la gastroscopía se pudo comprobar que no existia alteración del jugo gastrico ni de la mucosa gástrica. El aparato respiratorio y el cardiovascular se mantuvieron estables.

Se constató aumento del peso corporal en el grupo donde se administró la toxina en relación con el grupo control, demostrándose así que dentro de las acciones colaterales de la solución de la toxina el aparato digestivo continua incólume.

Con estos resultados en ratones, perros y carneros podemos evidenciar lo siguiente:

-Reducción y obliteración de masas tumorales.

-Negativización de exámenes citológicos y de biopsias.

-Evidente mejora clinica y morfológica.

-No acciones colaterales digestivas, respiratorias, ni

cardiovasculares.

-Esta evolución satisfactoria lograda en animales, es de beneficio incalculable, pudiéndose emplear esta solución acuosa para reducir la morbimortalidad producida en estas especies.

RESULTADOS

Los animales que recibieron el producto por vía oral, no presentaron evidencias clínico-morfológicas de toxicidad, ni modificaciones de su conducta habitual, dentro de los diferentes niveles de dosis ensayadas. Se observaron resultados altamente satisfactorios consistentes en reducción y obliteración completa de la masa tumoral en neoplasias malignas, naturales e inoculadas, mejora evidente de la sintomatología clínica y humoral. En las pruebas hematológicas y bioquímicas se comprobó la estabilización de los parámetros normales. En la gastroscopía se pudo comprobar que no existía alteración del jugo gástrico. Tampoco existían alteraciones en los aparatos respiratorios y cardiovascular. Se obtuvo negativización de las pruebas citológicas realizadas en la esfera genital y pared abdominal, con una alta supervivencia de los mismos; siendo en ratones con el tumor ascítico de Erlich de un 85%; en linfomas y adenocarcinomas de un 97% y en perros de un 100 % . En los ratones tratados por vía intraperitoneal se observaron durante un período de 1 a 3 minutos: signos de excitación, lagrimeos, salivación, erizamiento de los pelos e intento de fuga. Los animales que recibieron dosis inferiores evidenciaron el cuadro clínico discreto, de forma más leve hasta 2 minutos.

Se apreció ganancia significativa del peso corporal tanto con los tratamientos por vía intraperitoneal como por la oral. En el exámen anatomopatológico no se observó daño celular irreversible en las células sanas. En los perros portadores de tumores malignos naturales a los cuales se les administró la toxina diluida se utilizaron dosis de 0,2 ml por kg de peso diariamente, obteniéndose como resultado: reducción y obliteración de la masa tumoral, negativización de exámenes citológicos y biopsias, así como mejora evidente clínica y morfológica, por lo cual esta evolución satisfactoria lograda en animales es de beneficio incalculable, pudiéndose emplear la toxina para reducir la morbimortalidad producida en seres vivos, ya que los efectos de la toxina diluida no producen alteraciones una vez administrada por vía oral, según demuestran los exámenes toxicológicos agudos de control realizados según normas internacionales para posterior procedimiento y elaboración de medicamentos.

CONCLUSIONES

1. Es objetiva y real la acción antitumoral de la solución acuosa a partir de la toxina del alacrán Rhopalurus junceus en estos animales objeto de esta investigación.

2. En perros con tumores malignos naturales la supervivencia fue de un 100% con obliteración completa de la masa tumoral y mejora ostensible clínica y morfológica.

3. Con el tumor ascítico de Erlich en los ratones la supervivencia fue de más de un 85% con obliteración y reducción de las células tumorales.

4. En ratones con adenocarcinomas y linfomas el resultado fue de un 97% de curación.

5. Es más segura la administración por vía intraperitoneal en ratones albinos homocigóticos, sin embargo es menos segura en ratones albinos heterocigóticos machos y hembras con una DL 50 de 4.07 mg por kg de peso.

6. La administración por vía oral de la toxina diluida en ratones albinos, heterocigóticos machos y hembras es inocua, no presenta efectos tóxicos y carece de una DL 50.

7. En los carneros las manifestaciones digestivas por la administración por vía oral fueron totalmente negativas, esto demuestra aun más su inocuidad.

RECOMENDACIONES

1. Recomendamos la solución acuosa de toxina del alacrán Rhopalurus junceus en procesos tumorales de diferentes naturaleza en seres vivos, como:

-Adenocarcinomas

-Linfomas

-Tumor ascítico de Erlich

sin temer a reacciones adversas.

2. Adoptar medidas y vías que permitan hacer uso de esta solución teniendo como base su actividad antitumoral en los seres vivos.

3. Utilizar la solución acuosa de la toxina del alacrán Rhopalurus junceus en ensayos clínicos para su posterior uso en seres humanos.

4. Tomar medidas de aseguramiento del habitat natural, pudiendo ser vedadas estas zonas donde se localizan estos alacranes.

5. Fomentar la creación de criaderos del alacrán Rhopalurus junceus, teniendo en cuenta que es la base esencial para este tratamiento antitumoral.

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